1.該模型制備比較成熟，國(guó)內(nèi)外都有此模型，構(gòu)建和評(píng)價(jià)指標(biāo)一致，所以該模型應(yīng)用廣泛，具有統(tǒng)一的操作規(guī)程。

2. 該模型制備的關(guān)鍵：1）小鼠必須是重度免疫缺陷的，而且飼養(yǎng)環(huán)境必須潔凈；2）HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系統(tǒng)，HIV感染后，具有艾滋病病人相似的臨床癥狀，所以具有很高的比較醫(yī)學(xué)應(yīng)用價(jià)值。

1、 臨床癥狀

G1301V在長(zhǎng)期感染過(guò)程中，健康狀況良好，無(wú)典型感染癥狀。G1302V在感染前期狀態(tài)良好，但自感染350d后精神逐漸萎靡，長(zhǎng)期慢性腹瀉，于感染后457d死亡。

2、 SHIVKU-1靜脈感染恒河猴外周血病毒載量結(jié)果

兩只實(shí)驗(yàn)猴（G1301V和G1302V）都在感染后第4d就檢出了血漿病毒載量，其后一直在1.0×104 copies/mL左右波動(dòng)，沒(méi)有出現(xiàn)明顯的載量高峰（圖1）。

圖1 SHIV KU-1靜脈感染中國(guó)恒河猴外周血病毒載量結(jié)果

Fig.1 Theviremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SHIV KU-1

1、 SHIV KU-1靜脈感染恒河猴CD4+/CD8+比值結(jié)果

感染后外周血中CD4+/CD8+都有一個(gè)明顯下降過(guò)程（圖2）。G1301V在感染后的3w內(nèi)從感染前的1.96下降到0.50，短暫徘徊后持續(xù)上揚(yáng)，至3個(gè)月，已基本恢復(fù)至初始水平，達(dá)到1.53；G1302V感染前1.21，感染后3w降至0.1，其后穩(wěn)定在0.2左右，至感染后400d下降接近0。

圖2 SHIV KU-1靜脈感染中國(guó)恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴細(xì)胞比值

Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytesin Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV KU-1

SHIVKU-1靜脈感染恒河猴CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)結(jié)果

兩只猴G1301V和G1302V在CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)上變化基本相同（圖3）。感染后外周血CD4+T細(xì)胞數(shù)迅速下降，3w后分別從感染前990個(gè)/mL、1300個(gè)/mL下降到最低點(diǎn)420個(gè)/mL和76個(gè)/mL，其后基本保持水平，3個(gè)月時(shí)為590個(gè)/mL和180個(gè)/mL。G1302V在感染后期一直維持在100個(gè)/mL以下。

圖3 SHIV KU-1靜脈感染中國(guó)恒河猴外周血CD4+T淋巴細(xì)胞絕對(duì)數(shù)

Fig.3 The CD4+ T cell counts (per l blood) inChinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV KU-1

1、 實(shí)驗(yàn)用病毒：感染毒株為SHIV KU-1中國(guó)恒河猴細(xì)胞適應(yīng)株，中國(guó)恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度為103.75 TCID50/mL。

2、 感染動(dòng)物：選用體重4-6kg的SPF恒河猴。實(shí)驗(yàn)前體檢無(wú)異常，必須排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆轉(zhuǎn)錄D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴細(xì)胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相關(guān)的4種基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）篩查結(jié)果為陰性。所有感染動(dòng)物必須在ABSL-3室中進(jìn)行。

3、 感染方法：用0.4ml SHIV KU-1病毒原液經(jīng)后肢靜脈接種恒河猴。

4、 SHIVKU-1靜脈感染猴樣品采集和指標(biāo)測(cè)定：感染前和感染后按指定時(shí)間點(diǎn)采集EDTA抗凝血4mL，分別測(cè)定血常規(guī)、血漿病毒載量、CD4+/CD8+、CD4+細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。

5、 SHIVKU-1靜脈感染猴血漿病毒載量的測(cè)定：提取EDTA抗凝血漿中病毒RNA，使用SYBR Green I 實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR方法測(cè)定血漿病毒載量。

6、 SHIVKU-1靜脈感染猴外周血CD4+/CD8+比值及絕對(duì)數(shù)測(cè)定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗體標(biāo)記EDTA抗凝全血淋巴細(xì)胞，流式細(xì)胞儀測(cè)定CD4+/CD8+比值，并根據(jù)血常規(guī)結(jié)果，計(jì)算出CD4+T細(xì)胞絕對(duì)數(shù)。

一、 艾滋病概述

艾滋病(Acquired ImmunodeficiencySyndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系統(tǒng)嚴(yán)重?fù)p害為特征的傳染性疾病，是20世紀(jì)危害人類健康和生命最嚴(yán)重的病毒性疾病之一。自美國(guó)CDC報(bào)道首例艾滋病后，到20世紀(jì)80年代中期艾滋病發(fā)展成為一個(gè)性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690萬(wàn)人，2014年新增感染者200萬(wàn)，2014年因艾滋病死亡120萬(wàn)人。艾滋病在1985年傳入我國(guó)，截至2015年5月31日，歷年累計(jì)報(bào)告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成為關(guān)注的公共衛(wèi)生和社會(huì)熱點(diǎn)問(wèn)題，艾滋病的預(yù)防與治療也成為當(dāng)代生物醫(yī)學(xué)研究的前沿?zé)狳c(diǎn)之一。

二、艾滋病動(dòng)物模型簡(jiǎn)介

艾滋病發(fā)病機(jī)制研究、藥物和疫苗的保護(hù)性研究及評(píng)價(jià)等方面在很大程度上依賴?yán)硐氲膭?dòng)物模型。SIV/SAIDS(猴艾滋病)模型被廣泛接受和應(yīng)用，表現(xiàn)為和AIDS的臨床表征，發(fā)病過(guò)程、免疫缺陷特征等非常相似。然而，由于HIV與SIV畢竟是兩種不同的病毒，它們?cè)诨蛐蛄小そY(jié)構(gòu)和抗原性之間存在一定差異，使該模型的使用有一定的局限性。近年來(lái)，人們應(yīng)用分子生物學(xué)技術(shù)，將HIV-1重要基因與SIV做成嵌合體病毒（SIV/HIV-1，簡(jiǎn)稱為SHIV）感染恒河猴，用以研究HIV不同基因的功能以及病毒與宿主的相互作用。

SHIVKU-1是SHIV-HXBc2經(jīng)恒河猴和豬尾猴系列傳代得到的一株SHIV強(qiáng)毒株，它具有CXCR4嗜性，能在短期內(nèi)引起感染猴外周血CD4+T細(xì)胞的耗竭，繼而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)猴發(fā)病甚至死亡。

艾滋病的三種傳播途徑分別是經(jīng)血液、性和母嬰傳播，性傳播包括同性傳播和異性傳播兩種方式。艾滋病動(dòng)物模型的制備首先要考慮其實(shí)際應(yīng)用價(jià)值，最好的動(dòng)物模型可以最大限度的模擬人類疾病，包括使用與自然感染相同或接近的方式建立模型。為充分模擬靜脈注射吸毒人群的感染方式，通過(guò)靜脈途徑，病毒直接感染血液中的靶細(xì)胞，從而制備靜脈途徑艾滋病恒河猴感染模型。