到目前為止，已經(jīng)報道有2種非人靈長類動物（恒河猴、食蟹猴）和4種嚙齒類動物（大鼠、小鼠、田鼠、沙鼠），雪貂、家貓以及雞、鴨等禽類可以作為H5N1禽流感病毒動物模型用于實驗研究。低致病性H5N1禽流感病毒可以通過適應(yīng)建立鼠肺適應(yīng)株感染小鼠建立小鼠模型。非人靈長類動物通過鼻腔吸入較難感染，通常需要借助輔助器材進(jìn)行定位感染，動物感染后體征變化不顯著，肺組織出現(xiàn)局灶性病變。

前期研究顯示雪貂的受體分布情況與人極為接近，呼吸氣道長，上下呼吸道分腔明顯是流感病毒研究最為理想的動物模型，缺點是雪貂受物種特異性限制缺乏相應(yīng)的檢測試劑。小鼠對多種流感病毒敏感，一直被選擇作為流感病毒研究的動物模型，不僅有完備的檢測試劑，還有相應(yīng)的基因敲除、轉(zhuǎn)基因小鼠可用于機(jī)制方面的研究。早期研究曾在多種非人靈長類動物中（非洲綠猴、Pata猴、豬尾猴、食蟹猴）檢測到血清抗體陽性，并推測猴群感染病毒參與了流感大流行。研究發(fā)現(xiàn)非人靈長類動物感染禽流感病毒后的臨床改變、病理變化、抗原分布都與人類存在一定差異，研究結(jié)果顯示其對流感病毒敏感性較雪貂、小鼠低。至今沒有直接證據(jù)表明非人靈長類動物的受體分布情況與人接近。恒河猴中研究局部肺組織損傷機(jī)制不僅與巨噬細(xì)胞有關(guān)，在研究抗補(bǔ)體機(jī)制中還應(yīng)考慮PAMP的參與，NF-κB 等炎癥信號途徑的作用，這些研究在非人靈長類中受到一定限制，目前小鼠可以提供多方面抗補(bǔ)體機(jī)制研究。

受體比較

1) 人呼吸道上皮受體分布情況：α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體主要分布在鼻粘膜上皮細(xì)胞, α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體分布在鼻旁竇、咽、氣管、細(xì)支氣管上皮上。在終端呼吸性細(xì)支氣管上皮細(xì)胞也表達(dá)α-2，6連接唾液酸糖蛋白受體。α-2，3連接唾液酸糖蛋白受體出現(xiàn)在呼吸細(xì)支氣管與肺泡交界的無纖毛立方細(xì)支氣管細(xì)胞上，部分肺泡壁細(xì)胞表達(dá)這種受體，這種細(xì)胞為肺泡Ⅱ型細(xì)胞。病人感染H5N1禽流感病毒后，病毒主要分布在肺泡Ⅱ型細(xì)胞內(nèi)。

2) 雪貂除了氣管中極少數(shù)杯狀細(xì)胞既表達(dá)α-2，3SA受體又α-2，6SA受體，其上下呼吸道受體分布與人極為相似，小鼠多表達(dá)α-2，3SA受體，α-2，6SA受體較少，曾局限的認(rèn)為小鼠較適合用于α-2，3SA受體結(jié)合的病毒研究，后有研究發(fā)現(xiàn)受體特異性并不影響某些病毒對小鼠的致病力和復(fù)制能力。

3)有研究顯示通過體外實驗證實非洲綠猴上皮細(xì)胞與人類流感病毒和禽類流感病毒都有較好的結(jié)合能力，與人類上皮細(xì)胞的結(jié)合能力接近。缺乏實驗證據(jù)顯示其受體與人類受體分布相似度。

6.2感染途徑比較

1) 小鼠、雪貂通過輕微麻醉后，以吸入式方式感染，感染方式與人極為接近。

2) 恒河猴、綠猴、食蟹猴等需要以環(huán)甲膜穿刺、支氣管鏡定位感染等方式進(jìn)行感染，感染途徑與自然感染途徑差別較大，感染效果通常會出現(xiàn)肺組織局域性灶狀感染，與吸入性感染方式產(chǎn)生的病變程度、范圍存在一定差別。

感染后癥狀

1) 部分禽流感病毒在猴上皮細(xì)胞中復(fù)制受限或者發(fā)生不同程度的衰減。例如禽來源的H2N2病毒不能感染猴，H5N1高致病性禽流感病毒需要以高出雪貂感染劑量103倍的劑量感染猴，仍不致死，僅產(chǎn)生一過性體溫升高。

2) 幾乎所有禽流感病毒都能夠在雪貂中成功復(fù)制，并產(chǎn)生臨床可觀察的改變，例如體溫升高、體重下降、噴嚏、流涕、精神萎靡甚至死亡。

3)H5N1禽流感病毒感染小鼠后出現(xiàn)嚴(yán)重的肺炎，除呼吸道以外還在腦、脾、肝等組織中發(fā)現(xiàn)病毒抗原，并在腦組織中出病理改變，猴感染后在呼吸道以外的組織中未發(fā)現(xiàn)病毒抗原。

CRP基因敲除小鼠和人CRP轉(zhuǎn)基因小鼠在賽業(yè)（蘇州）生物科技有限公司模式動物研究中心完成，該中心具有符合國際標(biāo)準(zhǔn)的動物模型制備相關(guān)完備監(jiān)督管理制度。動物的繁殖及感染模型評估在中國疾控中心動物中心完成，所有操作在SFP級別下遵守二級生物安全管理規(guī)定進(jìn)行，實驗動物尸體實行無害化處理，對生態(tài)環(huán)境無影響。

1. 雪貂氣溶膠感染后臨床表現(xiàn)及上呼吸道復(fù)制情況

在接種H9N2病毒的所有雪貂中均未觀察到臨床癥狀，H9N2病毒不能通過飛沫從感染的雪貂傳播給空氣接觸組的雪貂，空氣接觸組雪貂鼻試子和咽拭子均未檢測到病毒。

2. 雪貂模型感染后血清特異性抗體產(chǎn)生情況

接觸雪貂的恢復(fù)期血清（21d.p.e.）對于病毒特異性抗體是陰性的，說明這種病毒不能通過空氣進(jìn)行傳播（表1）。

雪貂呼吸道解剖結(jié)構(gòu)上下呼吸道分腔明顯，受體分布與人極為接近，是迄今為止最為敏感的流感病毒感染動物模型。它對人流感病毒高度易感，病毒不經(jīng)適應(yīng)即能使雪貂致病，并易傳播給雪貂和人。在自然條件下，雪貂一般也是通過呼吸道吸入病毒的方式感染流感病毒，其感染后的發(fā)病過程和機(jī)體反應(yīng)也與人體相似。雪貂除對人流感病毒高度易感外，對禽流感、豬流感病毒也十分敏感，感染后出現(xiàn)典型癥狀。

分子生物學(xué)研究顯示，這是由于雪貂的呼吸道上皮細(xì)胞表面存在人流感病毒特異性受體α2,6糖鍵連接的唾液酸，而其肺泡上皮細(xì)胞表面也存在著禽流感病毒特異性受體α2,3糖鍵連接的唾液酸。

相較于其他流感動物模型，雪貂的優(yōu)勢為 ：（1）雪貂感染流感病毒后的癥狀、發(fā)病機(jī)制和免疫反應(yīng)與人類極為相似。（2）人甲、乙型流感病毒均可自然感染雪貂，這為在完全控制的群體內(nèi)觀察流感的傳播規(guī)律和流感病毒抗原性的漂移和轉(zhuǎn)變提供了可能。（3）雪貂的氣管較長，這樣就使其上、下呼吸道區(qū)室化，有利于研究流感病毒對呼吸道不同區(qū)域的效應(yīng)差異。（4）雪貂作為動物模型比嚙齒類大，易于監(jiān)測其體溫、脈搏和呼吸頻率。（5）在小型動物中，雪貂是唯一感染甲型流感病毒后自然出現(xiàn)發(fā)熱反應(yīng)的動物模型。

通過血凝抑制實驗（HI），對若干6～10月齡的成年去勢雪貂進(jìn)行篩選，選出對于目前流行的流感病毒血清抗體均為陰性者。

在感染之前，將雪貂飼養(yǎng)在生物安全3級實驗室中（ABSL3）中并監(jiān)測5到7天以測量其體溫。將皮下可植入溫度應(yīng)答器（BioMedic Data Systems;http://www.bmds.com）置于每個雪貂中，用于記錄雪貂每天的體溫。

雪貂經(jīng)過輕度麻醉后滴鼻感染107EID50A/Brambling/Beijing/16/2012（H9N2）病毒（Genbank：KC464595.1、KC464596.1、KC464597.1、KC464598.1、KC464599.1、KC464600.1、KC464601.1、KC464602.1)。

感染后24小時，對應(yīng)每只感染的雪貂在被傳播籠內(nèi)放入一只未攻毒的雪貂，研究病毒的傳播力。為了避免操作者操作過程中人為的污染，每次取樣時都要先處理被傳播組雪貂，同時還要保證用過的器械消毒后才可用于下只雪貂。每天記錄雪貂的臨床癥狀并監(jiān)測體溫。感染后1，3，5，7，9d采集感染組和被傳播組雪貂的鼻拭子和咽試子，置于1mlPBS中，接種雞胚，測定鼻拭子和咽拭子中的病毒滴度。感染后第14天收集感染組和被傳播組雪貂的血清，HI實驗測定血清轉(zhuǎn)化情況。

流感病毒是嚴(yán)重威脅人類健康的一種病原體，它能導(dǎo)致流感疫情甚至世界大流行，流感在各個年齡階段的人群中都可能爆發(fā)而引起急性發(fā)熱性呼吸道疾病。流感病毒為單股負(fù)鏈RNA病毒，屬于正黏液病毒科，呈球形或絲狀，直徑80-120nm。病毒外層為兩種不同糖蛋白構(gòu)成的輻射狀突起，即血凝素(HA)和神經(jīng)氨酸酶(NA)。根據(jù)HA和NA抗原的不同，又可分為許多亞型，H可分為16個亞型，N有9個亞型(N1～N9)。在所有的流感亞型中，H9N2備受關(guān)注，H9N2分布區(qū)域廣泛，偶爾還可以感染人。值得注意的是，H5N1、H7N9、及H10N8亞型禽流感的6個內(nèi)部基因均來自H9N2亞型病毒。文獻(xiàn)報道H9N2亞型不經(jīng)過適應(yīng)即可在小鼠體內(nèi)進(jìn)行有效復(fù)制。另外，有文獻(xiàn)報道，H9N2病毒在獲得2009年甲型H1N1病毒內(nèi)部基因后即可在雪貂群體間通過氣溶膠傳播。

一般感染H9N2的潛伏期為2～4d，平均3d。臨床多為急性起病，早期表現(xiàn)類似一般流感,主要為發(fā)熱，體溫大多持續(xù)在39℃以上，熱程1～7d,一般為3～4d,可伴有流涕、鼻塞、咳嗽、咽痛、頭痛和周身不適，少數(shù)患者有惡心、腹痛、腹瀉、稀水樣便等癥狀。重癥患者病情發(fā)展迅速，可出現(xiàn)肺炎、急性呼吸窘迫綜合征、肺出血、胸腔積液、全血細(xì)胞減少、腎功能衰竭、敗血癥、休克及Reye綜合征等多種并發(fā)癥。感染H9N2預(yù)后良好。